Theracumin là gì? Theracumin có tác dụng gì? Theracumin là một công thức mới của hợp chất polyphenolic curcumin,tập đoàn Theravalues ​​ra mắt VFE17_Theravalues_250, một sản phẩm curcumin mới, Theracurmin® Super tại Vitafood Châu Âu Palexpo, Geneva, Thụy Sĩ 9-11 tháng 5 năm 2017. Theracurmin® Super với khả năng sinh khả dụng tăng cường được đánh giá tốt ở Châu Âu. Theracurmin® có hiệu quả ức chế sự phát triển của tế bào ung thư bàng quang tuyến tiền liệt và tuyến tiền liệt thông qua việc gây ra chết tế bào apoptotic và bắt giữ chu kỳ tế bào

Giới thiệu

Gần đây, thuốc bổ sung và thay thế (CAM) đã nhận được sự quan tâm lớn của các bệnh nhân ung thư như một phương pháp điều trị thay thế (1). Trên thực tế, gần 40% bệnh nhân ung thư ở Hoa Kỳ có thể sử dụng ít nhất một loại phương pháp tiếp cận CAM (2). Các bác sĩ đặc biệt quan tâm đến việc sử dụng các loại thực phẩm khác nhau như CAMs, và đang cố khám phá các CAMs mới dựa trên thực phẩm do sự an toàn về thuốc và sự quen thuộc của họ đối với việc sử dụng. Trong số nhiều tác nhân CAM, curcumin, một polyphenol tự nhiên có nguồn gốc từ thân rễ của Curcuma longa, đã cho thấy lời hứa trong điều trị bệnh nhân ung thư (3). Curcumin đã được chứng minh có khả năng ức chế đáng kể sự phát triển của nhiều loại tế bào ung thư bằng cách điều chỉnh các phân tử khác nhau liên quan đến sự gia tăng tế bào ung thư (4). Nó cũng làm tăng hiệu quả chống ung thư của các tác nhân điều trị hóa học in vitro và trong cơ thể (5-7). Tuy nhiên, hiệu quả lâm sàng của curcumin vẫn còn hạn chế, rất có thể do tính khả dụng sinh học thấp (8). Để khắc phục nhược điểm này, Theracurmin® (nanocurcumin), một dạng curcumin mới, đã được phát triển bằng cách sử dụng một hệ thống phân phối thuốc vi lượng và kiểm soát bề mặt (9). Theracurmin® cho thấy khả năng sinh khả dụng và độ tan trong nước được cải thiện so với curcumin (9). Ngoài ra, Theracurmin® cải thiện tính khả thi của xét nghiệm in vitro và cuối cùng là quản lý in vivo (10,11). Mặc dù những lợi thế sinh học này, vẫn chưa có nghiên cứu nào về tác động của Theracurmin® trong ung thư tiết niệu. Ở đây, chúng tôi khảo sát các đặc tính chống ung thư của Theracurmin® trên ung thư tuyến tiền liệt ở người và các tế bào ung thư bàng quang trong ống nghiệm và so sánh chúng với các chất curcumin. Hơn nữa, chúng tôi đã kiểm tra các cơ chế phân tử có liên quan về hiệu quả chống ung thư tiềm tàng của Theracurmin® trong các khối u ác tính tiết niệu.

Vật liệu và phương pháp

Các dòng tế bào và thuốc thử Các dòng tế bào ung thư tiền liệt tuyến ở người (LNCaP, PC3, và DU145) thu được từ bộ sưu tập nuôi kiểu Mỹ (ATCC, Rockville, MD, USA). Chúng tôi đã sử dụng môi trường RPMI-1640 (Welgene, Daegu, Hàn Quốc) cho LNCaP và PC3 và môi trường Eagle của Eagle (DMEM; Welgene) của Dulbecco cho các tế bào DU145 làm môi trường nuôi cấy cơ bản. Các dòng tế bào ung thư bàng quang người (T24, 253J, và HTB9) cũng được mua từ ATCC. Để tạo ra một dòng tế bào kháng cisplatin (T24R2), chúng tôi đã thực hiện desensitization nối tiếp các tế bào T24 như đã mô tả trước đó (12).

Các dòng tế bào ung thư bàng quang người được nuôi cấy trong môi trường RPMI-1640. Tất cả các phương tiện truyền thông được bổ sung 10% huyết thanh bò (Welgene), và 1% penicillin-streptomycin, và 1% axit amin không cần thiết (cả hai từ Invitrogen, Carlsbad, CA, USA). Curcumin (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) và Theracurmin® (Công ty TNHH Handok Pharmaceuticals, Hàn Quốc) đã được chuẩn bị trong dimethyl sulfoxide (DMSO) và pha loãng vào môi trường tăng trưởng sao cho nồng độ cuối cùng của DMSO đã làm không vượt quá 0,1% (v / v). Môi trường chứa 0,1% DMSO được sử dụng làm kiểm soát âm. Kiểm tra sự gia tăng tế bào Để kiểm tra sự gia tăng tế bào, chúng tôi đã sử dụng Bộ đếm Đếm Tế bào-8 (CCK-8, Công nghệ Mojácd Dojindo, Gaithersburg, MD, USA).

Các tế bào (2 x 103 tế bào / giếng) đã được gieo lên trên 96 tấm tốt và ủ trong 24 giờ. Các tế bào được điều trị bằng curcumin hoặc Theracurmin® trong 24, 48 và 72 giờ, và sau đó thêm 10 μl dung dịch CCK-8 vào các miếng 96 giếng. Sau 4 giờ ủ, độ hấp thụ ở bước sóng 450 nm được xác định bằng máy đọc mẩu (Molecular Devices, Sunnyvale, CA, USA). Kết quả khả năng sống của tế bào được báo cáo là sự thay đổi gấp so với số liệu thu được từ ngày đầu tiên của việc gieo hạt tế bào. Thử nghiệm Clonogenic Các tế bào (1 x 103 tế bào / giếng) đã được gieo vào các đĩa 35mm2 và được điều trị bằng curcumin hoặc Theracurmin® trong 48 giờ.

Để hình thành các khuẩn lạc có thể nhìn thấy, các tế bào được nuôi cấy thêm 14 ngày trong điều kiện nuôi cấy curcumin hoặc Theracurmin® miễn phí. Sau khi cố định với dung dịch formalin đệm 10%, các mẫu được nhuộm với dung dịch pha lê 0,1% tinh thể (cả hai đều từ Sigma-Aldrich). Cuối cùng, các mẫu được chụp ảnh, và số khuẩn lạc có thể nhìn thấy được bao gồm hơn 50 tế bào riêng biệt được xác định bằng cách sử dụng một kính hiển vi quang học SZX7 (Olympus, Tokyo, Nhật Bản). Dòng cytometry để phân tích chu kỳ tế bào Các tế bào (3 x 105 tế bào / giếng) đã được mạ trên các đĩa 60mm2 và được ủ với curcumin hoặc Theracurmin® trong 48 giờ. Các tế bào được cố định trong ethanol 70% và phản ứng với RNase A (10 μg / ml) trong 1 giờ ở 37 ° C. Sau đó, các tế bào bị nhuộm với dung dịch iốt propidium (10 μg / ml) trong 30 phút ở 4 o C trong phòng tối. Phân bố chu kỳ tế bào được phân tích bằng cách sử dụng một máy xét nghiệm FACSCalibur của BD (BD Biosciences, San Jose, CA, USA).

Phân tích Western blot Để trích xuất tổng số protein, các tế bào đã được lysed với bộ đệm khảo nghiệm suy giảm miễn dịch phóng xạ [50 mM Tris-HCl (pH 8.0), natri clorua 150 mM, 1.0% NP-40, 0.5 natri deoxycholate natri, 0.1% sodium dodecyl sulfate (SDS) và 1 mM phenylmethylsulfonyl fluoride]. Sau khi đo nồng độ protein của mỗi mẫu sử dụng bộ xét nghiệm protein BCA (Pierce, Rockford, IL, USA), các mẫu được chuẩn bị với lượng protein tương đương trong 1X SDS đệm.

Các mẫu protein được điện hóa trên gel SDS-PAGE và chuyển sang các màng poly-vinylidene difluoride (Millipore, Billerica, MA, USA). Sau khi các mẫu bị chặn với 5% (w / v) sữa khô không béo ở nhiệt độ phòng trong 1 giờ, các blot được ủ với các kháng thể nguyên phát qua đêm ở 4 ° C. Các kháng thể chính được sử dụng trong nghiên cứu này là caspase chống cắt 3, -8, -9, polymerase poly (adenosine diphosphate-ribose), cytochrome c, cyclin D1, cyclin E1, p-Akt, Akt, p- Erk, và Erk (1: 1,000; Công nghệ báo hiệu ô, Inc, Beverly, MA, USA). Các blot được ủ với các kháng thể thứ cấp kết hợp peroxidase của cây ngải mộc ngựa (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA, USA) trong 45 phút ở nhiệt độ phòng.

Cuối cùng, nồng độ protein biểu hiện được phát hiện bằng cách sử dụng một Enhanced Chemiluminescence Western Blot Substrate kit (Pierce). Phân tích thống kê Ba thí nghiệm độc lập đã được thực hiện trong ba lần, và các dữ liệu được trình bày như là sai số trung bình ± của trung bình (SEM). Phân tích thống kê được thực hiện bằng phần mềm GraphPad Prism (GraphPad Software Inc., San Diego, CA, USA). Chúng tôi xem xét dữ liệu với giá trị p <0,05 là đáng kể, được xác định bởi các thử nghiệm nhiều phạm vi của Thổ Nhĩ Kỳ.